Obtention et culture de protoplastes de Sequoia sempervirens (D. Don. ) Endl. Et Sequoiadendron giganteum (Lindl. ) Buchholz

par Patricia Charrier

Thèse de doctorat en Sciences biologiques

Sous la direction de Yvette Dattée.

Soutenue en 1988

à Paris 11 , en partenariat avec Université de Paris-Sud. Faculté des Sciences d'Orsay (Essonne) (autre partenaire) .


  • Résumé

    L'objectif de ce travail fut l'obtention et la culture de protoplastes chez Sequoia sempervirens et Sequoiadendron giganteum, en étudiant deux origines de matériel : apex de tiges cultivées in vitro et germinations. Nous avons essayé de définir les facteurs favorables à l'obtention d'un rendement suffisant en protoplastes soit par prétraitement du matériel végétal (prétraitement des plants à l'obscurité, préplasmolyse des tissus), soit par l'étude la solution de digestion de la paroi cellulaire (composition enzymatique, ajout de stigmasterol), soit par l'e��tude de l'âge du matériel végétal. Nous avons pu ainsi mettre en évidence l'existence de facteurs non contrôlés influençant grandement les expérimentations et masquant l'effet éventuel des traitements effectués. D'autre part, nous avons tenté la culture de ces protoplastes afin d'obtenir des divisions cellulaires et la formation de microcolonies en étudiant la densité d'ensemencement, les milieux de culture, les équilibres hormonaux et l'effet éventuellement stimulateur d'une coculture des protoplastes avec une aliquote de suspension cellulaire. La densité de 5 10+4 protoplastes. Ml-1, le milieu de culture de KAO et MYCHAYLUK (1975) et l'équilibre hormonal ANA 8,1 uM. BAP 2,2 uM, KIN 2,4 uM, 2,4D 2,3 uM se sont révélés favorables à la survie des protoplastes, alors qu'une coculture avec une aliquote de suspension cellulaire ne semble pas influencer ce facteur. Nous avons pu obtenir pour chaque espèce et pour chaque origine de matériel végétal, des microcolonies survivant jusqu'à des stades 6 cellules pour celles dérivées de germinations, et 30 cellules pour celles dérivées d'apex de tiges.

  • Titre traduit

    Obtention and culture of protoplasts of Sequoia sempervirens (D. Don. ) Endl. And Sequoiadendron giganteum (Lindl. ) Buchholz


  • Résumé

    The aim of this work has been to obtain and culture protopasts in Sequoia sempervirens and sequoiadendron giganteum. Two origins were studied: in vitro cultured stem apices and germinations. We tried to define the favourable factors for a sufficient protoplasts yield either by pretreatment of the plant material (plant pretreatment in darkness, tissue preplasmolysis), by the solution for cell wall digestion (enzyme composition, stigmasterol addition) or by the age of the plant material. Thus, we could show the existence of non-controlled factors largely influencing the experimentation and overlapping the probable effect of the realized treatments. On the other hand, we tried the culture of these protoplasts to obtain cell divisions and microcolony formation in observing the culture density, the culture media, the hormone level and the probably stimulating effect of a protoplast co-culture with a cell suspension aliquot. The density of 5 10+4 protoplasts. Ml-1, the KAO and MYCHAYLUK (1975) culture medium and the hormone level of 8,1 uM NAA, 2,2 uM BAP, 2,4 uM KIN, 2,3 uM 2,4-D proved favourable for protoplasts survival, though a co-culture with cell suspension aliquot does not seem to influence this factor. For each species and for each origin of the plant material we obtained microcolonies surviving up to 6 cell stage for those derived from germinations and up to 30 cell stage for those derived from stem apices.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (193 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.180-193

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 0g ORSAY(1988)324
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-035172
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