Contribution à la chromatographie de pseudo-affinité : modèle de protéines, les immunoglobulines G placentaires

par Safia Kanoun

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie

Sous la direction de Mookambeswaran A. Vijayalakshmi.


  • Résumé

    L'utilisation des méthodes de purification par affinité permet l'obtention d'une protéine pure avec une rentabilité maximale. Cependant, ces méthodes qui sont souvent bio spécifiques, ne peuvent être utilisées pour purifier différents types de protéines. Les recherches entreprises dans le cadre de cette thèse ont pour objectif l'étude de la purification des protéines sur ligands généraux type acide aminé (histidine) et l'acide aminocaproïque. Nous avons pris comme protéine modèle : les immunoglobulines G placentaires. L'étude a mis en évidence la possibilité de purification de ces IgG sur le ligand général histidine. Ce ligand a été couplé soit à des supports organiques (le sepharose 4 B et le superose) soit à des supports inorganiques (la silice : spherosil X0B030). Les conditions de purification des IgG sur colonne d'histidyl-sepharose ainsi que la spécificité de ce ligand vis-à-vis des sous classes d'IgG ont été déterminées. Par ailleurs, nous avons étudié l'influence du bras, qui sépare le ligand de la matrice, sur la purification des IgG sur support organique ou inorganique ; tout en mettant l'accent sur l'importance du traitement pré chromatographique des échantillons protéiques. En ce qui concerne l'interaction IgG-histidine, des investigations ont été effectuées et ont servi à avoir des informations assez générales quant à sa nature. La deuxième partie concerne l'utilisation du ligand aminocaproate couplé à la silice pour la purification des IgG. Ainsi, nous avons déterminé les conditions de la purification des IgG placentaires sur colonne d'aminocaproyl-silice.

  • Titre traduit

    Contribution to the pseudo-affinity chromatography : protein model, human placental immunoglobulin G (IgG)


  • Résumé

    Affinity chromatography can be considered as one of simplest and most efficient method of protein purification available today. However, this method which often involves the use of biospecific ligands, poses the problem of inadaptability for the purification of different proteins. The aim of the research work carried out for this study is to purify the immunoglobulin G (IgG) on immobilised amino acid particularly the histidine. This general ligand was coupled to organic supports such as sepharose 4B and superpose 12 and to inorganic supports such us silica (spherosil X0B030). The optimal conditions of purification of IgG on hystidyl-sepharose 4B were determined. We have also determined the specificity of the general ligand histidine to IgG subclasses. Moreover, we have studied the influence of the spacer arm, separating the ligand from the matrice, on the purification of the IgG from human placental extract using organic and inorganic supports. Furthermore, the importance of prechromatographic sample treatment has been discussed. Also, a study has been carried out to elucidate the general nature of protein-ligand interactions. We have also used the aminocaproic acid coupled to silica for the purification of IgG and have determined the optimal conditions of IgG purification from human placental extract on amino-silica column.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (122 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 95 réf.

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  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1988 KAN 274
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