Étude de fonctions symbiotiques codées par le mégaplasmide pSym de Rhizobium meliloti

par Diógenes José Infante Herrera

Thèse de doctorat en Microbiologie

Sous la direction de Pierre Boistard.

Soutenue en 1987

à Paris 11 , en partenariat avec Université de Paris-Sud. Faculté des Sciences d'Orsay (Essonne) (autre partenaire) .

Le président du jury était André Berkaloff.

Le jury était composé de Pierre Boistard, André Berkaloff, Luisa Hirschbein.

Les rapporteurs étaient Luisa Hirschbein.


  • Résumé

    Chez Rhizobiummeliloti, le partenaire symbiotique de la luzerne, les gènes impliqués dans la reconnaissance et l'infection de l'hôte (gènes nod) et les gènes de structure de la nitrogénase (gènes nifHDK) sont portés par un Mégaplasmide de 1500 Kb, le pSym. Une région de 300 Kb du pSym qui porte les gènes nifHDK et les gènes nod ont été clonée dans un vecteur transmissible, le RP4. Le plasmide hybride ainsi obtenu a été utilisé pour mutagéniser à l'aide du transposon Tn7 la région correspondante du pSym. Nous avons montré que cette région de 300 Kb porte un site dans lequel le Tn7 s'insère à très haute fréquence chez Escherichia coli. Le sous-clonage d'un fragment de 9,2 Kb portant ce point-chaud dans le vecteur RP4 nous a permis de démontrer l'influence de l'hôte sur la fréquence de transposition du Tn7 : la fréquence d'insertion dans le point-chaud chez R. Meliloti est de plusieurs ordres de grandeur inférieure à celle chez E. Coli. Ceci confirme que la fréquence de transposition dépend du contexte cellulaire. Malgré l'existence de ce point-chaud, la mutagenèse par transposon a permis de mettre en évidence un groupe de gènes fix situés à 200 Kb de nifKDH. Grâce à l'utilisation de délétions, nous avons démontré qu'entre ces gènes fix et les gènes nod distants de 160 Kb environ il n'y a pas de gènes symbiotiques. L'utilisation de délétions site-dirigées et la mutagenèse par transposon nous a permis de trouver la frontière gauche de ce cluster fix. La répartition des gènes symbiotiques sur le pSym est donc tout à fait irrégulière, des "clusters" de gènes symbiotiques étant séparés par des régions silencieuses.

  • Titre traduit

    Study of symbiotic functions encoded by the pSym megaplasmid of Rhizobium meliloti


  • Résumé

    In R. Meliloti, the symbiotic partner of alfalfa, involved in host recognition and inffection (nod genes) and. Nitrogenase (nif) are carried by pSym a 1500 Kb megaplasmid. A 300 Kb region of pSym wich carries the nod genes as well as nifHDK was cloned on a RP4, a trasmissible vectar. The hybrid plasmid thus obtained was used to mutagenize the homologus region of pSym by inserting the transposon Tn7 into the cloned region in E. Coli and then introducing the mutated fragment by homologus recombination. This allowed us to show that the 300 Kb pSym region carries a hat spot for Tn7 insertion in E. Coli. We subcloned a 9 Kb fragment carrying this hat spot in the RP4 vector. This allowed us to demonstrate the influence of the host and the transposition frequency of Tn7. The insertion frequency in the host spot in R. Melilotiis several orders of magnitude lower than in E. Coli. This confirm that the transposition frequency of a transposon in a given DNA is strongly dependent and the cellular contex. In spite of the presence of this hot spot, Tn7 mutagenesis led to the discovery of a cluster of fix genes 200 Kb distant from nifHDK. The use of large deletions allowed us to show that there are no symbiotic genes between this new fix cluster and the nod genes which are about 160 Kb distant. Furthermore using site directed deletion or transposon mutagenesis we could determine the left border of the new fix cluster. Then the symbiotic genes presents in the pSym megaplasmid are clustered.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (140 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 135-140

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 0g ORSAY(1987)129
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-034469
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