Etude des interactions entre protéines : application à la séparation d’enzymes pectinolytiques

par Laurence Carpentier

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquée, psychologie

Sous la direction de Émile Ségard.

Soutenue en 1986

à Compiègne .

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  • Résumé

    Le but de l’étude est la séparation de deux activités pectinolytiques à partir de préparations commerciales produites chez Aspergillus Niger. Nous devions produire une solution de pectinestérase exempte d’activité polygalacturonase afin de l’utiliser dans un procédé de clarification de jus de fruits. La méthode de séparation utiliser est la chromatographie liquide. Nous avons constaté un fractionnement de ces enzymes sur des supports classiques de types échangeurs d’ions et hydrophobes, mais il y a toujours une activité polygalacturonase résiduelle avec la pectinesterase. Nous avons ensuite tenté une résolution de ces enzymes sur un support protéique pouvant présenter plusieurs types d’interactions simultanée. Nous avons utilisé pour cela de l’albumine bovine sérique immobilisée sur du sépharose 4B ; Les enzymes interagissent à Ph 4. 5 tampon acétate. La pectinestérase est éluée du support par un tampon phosphate Ph 8. La polygalacturonase est éluée du support par un détergent Triton X 100. La pectinestérase interagit ioniquement sur les sites cationiques de l’albumine. La polygalacturonase, de même, interagit de façon ionique sur les charges positives de l’albumine et subit une interaction secondaire hydrophobe amplifiée par une faible concentration en ions phosphates. Les protéines d’activité polygalacturonase interagissent avec les groupes carboxyliques à pH 4. 5 sur l’albumine ne subissent pas l’interaction hydrophobe. Elles sont éliminées par une chromatographie sur un support échangeur de cation. Le profil chromatographique varie en fonction de l’état de pureté de l’albumine et de l’espèce animale productrice. Une conformation ouverte de l’albumine est nécessaire ; elle est provoquée par l’action d’une forte charge positive, ici l’ion trisaminométhane tamponné avec du bicarbonate de sodium. Ainsi, en couplant les supports de carboxyméthyl séphadex et d’albumine bovine sépharose , nous observons une fraction de pectinestérase débarrassée d’activité depolymérisante.

  • Titre traduit

    Study of interactions between proteins. Application to the pectic enzymes separation


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Informations

  • Détails : 131 P.
  • Annexes : 69 REF

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1986 CAR 24
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